분자 생물학에서는 다양한 완충제 선택과 DNA 분리 단계별 준비가 단백질 발현 단계로 넘어가거나 다른 맥시 - 준비 키트를 다시 시작하는 것과 다를 수 있습니다. 그들의 중요성에도 불구하고, 완충액 조리법은 종종 다른 구성 성분에 대한 설명이나 근거없이 작성된 바로 그 조리법입니다. 하나의 그러한 완충액은 글루코스 - 트리스 -EDTA 또는 GTE 완충액이다.
$config[code] not foundGTE는 무엇을 위해 사용됩니까?
GTE는 박테리아 세포 펠릿을 재용 해하기 전에 세포를 용해 (파열)하여 플라스미드 DNA를 채취하기 위해 사용됩니다. 세포막을 부드럽게하는 리소자임 (Lysozyme)은 종종 GTE 완충액과 함께 추가됩니다. 이 단계에서 전체 세포의 균질 현탁액을 달성하면 이후에 첨가되는 용해 액이 모든 세포에 도달 할 수있어 좋은 DNA 수확량을 얻는 것이 중요합니다. GTE는 DNA에 대한 안정적인 환경을 제공하면서이를 수행하도록 설계되었습니다.
삼투압을위한 포도당
50mM (밀리몰)의 포도당 설탕을 세포 밖의 용질 농도가 세포 내부의 농도에 가깝도록 삼투압을 유지하기 위해 GTE 완충액에 첨가합니다. 이것은 조기 세포 용해를 방지하여 응집 및 분해로 인한 DNA 수율을 낮출 수 있습니다. 완충액의 다른 구성 요소도 용액의 삼투압에 기여하지만, 비 전해질 인 포도당은 용액의 완충 특성을 방해하지 않기 때문에 좋은 선택입니다.
pH 안정성을위한 Tris
Tris는 매우 일반적인 pH 완충액 인 tris (hydroxymethyl) aminomethane의 약식 이름입니다. GTE 완충액의 경우 완충액에 산성 염 (Tris-HCl)을 25mM의 농도로 첨가한다. 이것은 플라스미드 DNA의 산 가수 분해 (분해) 및 다른 세포 성분의 원하지 않는 부반응을 방지하기위한 이상적인 pH 인, 생리 학적으로 거의 8.0 인 용액의 pH를 유지시킨다.
EDTA는 DNA 분해를 방지합니다
EDTA 또는 에틸렌 디아민 테트라 아세트산은 용액에서 금속 이온을 포착하거나 "킬레이트"하여 원하지 않는 부반응에 관여하지 못하게합니다. GTE 버퍼에서, EDTA를 10mM에서 첨가 하였다. 그 주요 목적은 완충액에 유리 아연, 마그네슘 및 칼슘을 모으기 때문에 금속을 필요로하는 특정 경로에 의한 DNA 분해를 방지합니다.
몇 가지 중요한 팁
GTE 완충액을 차갑게 유지하고 소량으로 만들어 의도하지 않은 박테리아의 번식을 방지하십시오. 설탕과 조절 된 pH는 훌륭한 성장 매체를 만듭니다. 항상 정수 된 물을 사용하십시오. 수돗물은 파이프에서 나오는 금속 이온이 너무 많아서 EDTA가 포획 할 수있는 능력을 압도 할 수 있습니다. 샘플에 간섭 RNA가 있다고 의심되는 경우 RNase A를 100 μg / ml로 GTE 버퍼에 첨가하여 문제를 제거하십시오.
